Introduction

जैविक अनुसंधान की दुनिया में, नए प्रोटीन और उनके कार्यों का पता लगाना हमेशा एक चुनौतीपूर्ण कार्य होता है। विशेषज्ञों का एक समूह, जो Streptomyces lincolnensis और Streptomyces caelestis जैसे बैक्टीरिया पर काम कर रहा है, ने हाल ही में कुछ नए खोजें की हैं। इस लेख में, हम लिंकोमाइसिन और सेलिस्टिसेटिन जैसे महत्वपूर्ण एन्टीबायोटिक्स के उत्पादन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने वाले प्रोटीन – LmbF और CcbF के बारे में विस्तार से जानेंगे।

Full Article

Eurofins Genomics ने Oligonucleotide primers और DNA sequencing सेवाओं की पेशकश की। Restriction enzymes और PrimeSTAR MAX DNA polymerase Takara Bio Inc. से खरीदी गईं, जबकि solvents और chemicals Wako Chemicals, Merck KGaA और Hampton Research से खरीदे गए। Polymerase chain reaction (PCR) TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Gradient system का उपयोग कर किया गया। NMR spectra को Bruker AVANCE III HD 900 MHz और ECX-500 MHz (JEOL) spectrometers पर रिकॉर्ड किया गया।

Plasmids का निर्माण

LmbF जीन को Streptomyces lincolnensis ATCC 25466 के chromosomal DNA से PCR के माध्यम से amplify किया गया। इसे pET42b vector में NdeI और XhoI restriction sites के माध्यम से insert किया गया। इसी तरह, CcbF जीन को भी उसी प्रक्रिया से तैयार किया गया, जिससे C-terminally His₈-tagged LmbF और CcbF का उत्पादन हुआ।

CcbF और LmbF का Expression और Purification

pET42b plasmids को Escherichia coli BLR(DE3) में transform किया गया, जो pGro7 plasmid को harbor करता है। इन strains को LB medium में cultured किया गया। जब OD₆₀₀ 0.6 तक पहुँच गई, तब IPTG को target protein expression को induce करने के लिए जोड़ा गया।

Assays और Labelling

LmbF और CcbF के enzymatic assays में substrate 4 का उपयोग किया गया। विभिन्न परिस्थितियों के अंतर्गत इनकी enzymatic activities का परीक्षण किया गया। ¹⁸O₂ और D₂O labelling experiments के माध्यम से इन प्रोटीनों की गतिविधि को और बेहतर समझा गया।

Natural Thiooctose Substrate का उत्पादन

S. lincolnensis ΔlmbIH strain से natural thiooctose substrate का उत्पादन किया गया। इस प्रक्रिया में विभिन्न purification steps शामिल थे, जिसमें Amberlite XAD-4 का उपयोग किया गया।

Structural Determination और Crystallization

LmbF और CcbF के crystals को एक दिन में प्राप्त किया गया। X-ray diffraction datasets को एक विशेष प्रक्रिया के माध्यम से collect किया गया और इनकी structures को refine किया गया।

Docking और MD Simulations

LmbF और CcbF के लिए ligand docking किया गया, जिसमें molecular dynamics simulations का भी उपयोग किया गया।

Conclusion

इस अनुसंधान ने LmbF और CcbF प्रोटीनों की संरचना और कार्यों को उजागर किया है, जो कि लिंकोमाइसिन और सेलिस्टिसेटिन जैसे महत्वपूर्ण एन्टीबायोटिक्स के उत्पादन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। भविष्य में इन प्रोटीनों के अध्ययन से नई औषधियों के विकास में मदद मिल सकती है।

FAQs Section

1. LmbF और CcbF क्या हैं?

LmbF और CcbF प्रोटीन हैं जो Streptomyces बैक्टीरिया में पाए जाते हैं। ये प्रोटीन लिंकोमाइसिन और सेलिस्टिसेटिन जैसे एन्टीबायोटिक्स के उत्पादन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।

2. Oligonucleotide primers का क्या उपयोग है?

Oligonucleotide primers DNA amplification में उपयोग होते हैं। ये विशेष अनुक्रम होते हैं जो DNA के विशिष्ट हिस्से को पहचानने और बढ़ाने में मदद करते हैं।

3. PCR क्या है?

PCR (Polymerase Chain Reaction) एक तकनीक है जो DNA के एक विशेष हिस्से की संख्या को बढ़ाने के लिए प्रयोग की जाती है। यह विधि अनुसंधान और चिकित्सा दोनों में महत्वपूर्ण है।

4. Enzymatic assays का महत्व क्या है?

Enzymatic assays का उपयोग प्रोटीनों की गतिविधि को मापने के लिए किया जाता है। ये assays यह पता लगाने में मदद करते हैं कि प्रोटीन कैसे कार्य करते हैं और उनका प्रभाव क्या होता है।

5. Crystallization प्रक्रिया क्या है?

Crystallization एक प्रक्रिया है जिसमें प्रोटीन के क्रिस्टल बनाए जाते हैं ताकि उनकी संरचना को बेहतर ढंग से समझा जा सके। यह प्रक्रिया X-ray diffraction के माध्यम से प्रोटीन की संरचना को विश्लेषित करने में मदद करती है।

Tags

LmbF, CcbF, Streptomyces, Enzymatic Assays, PCR, Crystallization, Docking, Molecular Dynamics, Antibotics, Research.